Agonist-dependent modulation of G-protein coupling and transduction of 5-HT1A receptors in rat dorsal raphe nucleus

5-HT1A receptors couple to different Go/Gi proteins in order to mediate a wide range of physiological actions. While activation of post-synaptic 5-HT1A receptors is mainly related to inhibition of adenylyl cyclase activity, functionality of autoreceptors located in raphe nuclei has been classically ascribed to modifications of the activity of potassium and calcium channels. In order to evaluate the possible existence of agonist-directed trafficking for 5-HT1A autoreceptors in the rat dorsal raphe nucleus, we studied their activation by two agonists with a different profile of efficacy [(+)8-OH-DPAT and buspirone], addressing simultaneously the identification of the specific Gα subtypes ([35S]GTPγS labelling and immunoprecipitation) involved and the subsequent changes in cAMP formation. A significant increase (32%, p<0.05) in (+)8-OH-DPAT-induced [35S]GTPγS labelling of immunoprecipitates was obtained with anti-Gαi3 antibodies but not with anti-Gαo, anti-Gαi1, anti-Gαi2, anti-Gαz or anti-Gαs antibodies. In contrast, in the presence of buspirone, significant [35S]GTPγS labelling of immunoprecipitates was obtained with anti-Gαi3 (50%, p<0.01), anti-Gαo (32%, p<0.01) and anti-Gαi2 (29%, p<0.05) antibodies, without any labelling with anti-Gαi1, anti-Gαz or anti-Gαs. The selective 5-HT1A antagonist WAY 100635 blocked the labelling induced by both agonists. Furthermore, (+)8-OH-DPAT failed to modify forskolin-stimulated cAMP accumulation, while buspirone induced a dose-dependent, WAY 100635-sensitive, inhibition of this response (Imax 30.8±4.9, pIC50 5.95±0.46). These results demonstrate the existence of an agonist-dependency pattern of G-protein coupling and transduction for 5-HT1A autoreceptors in native brain tissue. These data also open new perspectives for the understanding of the differential profiles of agonist efficacy in pre- vs. post-synaptic 5-HT1A receptor-associated responses.This research was supported by Ministry of Science, SAF04–00941, SAF07-61862, Fundación Alicia Koplowitz, Fundación de Investigación Médica Mutua Madrileña, Instituto de Salud Carlos III and University of Cantabria-FAES research contract.Peer reviewe

Advances in lanthanide‐based luminescent peptide probes for monitoring the activity of kinase and phosphatase

This is the peer reviewed version of the following article: Pazos, E. and Vázquez, M. E. (2014), Advances in lanthanide‐based luminescent peptide probes for monitoring the activity of kinase and phosphatase. Biotechnology Journal, 9: 241-252. doi:10.1002/biot.201300203, which has been published in final form at https://doi.org/10.1002/biot.201300203. This article may be used for non-commercial purposes in accordance with Wiley Terms and Conditions for Use of Self-Archived VersionsSignaling pathways based on protein phosphorylation and dephosphorylation play critical roles in the orchestration of complex biochemical events and form the core of most signaling pathways in cells (i.e. cell cycle regulation, cell motility, apoptosis, etc.). The understanding of these complex signaling networks is based largely on the biochemical study of their components, i.e. kinases and phosphatases. The development of luminescent sensors for monitoring kinase and phosphatase activity is therefore an active field of research. Examples in the literature usually rely on the modulation of the fluorescence emission of organic fluorophores. However, given the exceptional photophysical properties of lanthanide ions, there is an increased interest in their application as emissive species for monitoring kinase and phosphatase activity. This review summarizes the advances in the development of lanthanide‐based luminescent peptide sensors as tools for the study of kinases and phosphatases and provides a critical description of current examples and synthetic approaches to understand these lanthanide‐based luminescent peptide sensorsWe thank the support of the Spanish government’s grants SAF2010-20822-C02, CTQ2012-31341, CTQ2009-14431,SAF2007-61015 and the Xunta de Galicia INCITE09 209 084PR, GRC2010/12, PGIDIT08CSA-047209PR. E.P.thanks the Fundación Barrié de la Maza for her postdoc-toral fellowshipS

Sensores luminiscentes de proteínas implicadas en cáncer

El desarrollo de sensores selectivos y eficientes representa uno de los mayores retos de las investigaciones actuales en el campo de la biomedicina. Nuestro trabajo se ha centrado en el desarrollo de sensores luminiscentes para estudiar procesos de interacción proteína-proteína de relevancia biológica y más concretamente, para la detección selectiva de proteínas implicadas en el ciclo celular y factores de transcripción oncogénicos. 1. Sensores de proteína quinasa C. La fosforilación de proteínas reguladoras es la modificación más frecuentemente para modular los mecanismos celulares. Las quinasas que catalizan la transferencia de fosfato están implicadas prácticamente en cada aspecto del funcionamiento celular. Un claro ejemplo es la proteína quinasa C que juega un papel importante en la regulación del ciclo celular y por este motivo existe un gran interés en el desarrollo de sensores específicos de esta proteína. Se han desarrollado varios péptidos que actúan como sensores de la proteína quinasa C que incorporan en su secuencia un complejo quelatante de lantánidos coordinativamente insaturado y un residuo de Trp que permite la emisión del metal por transferencia de energía intramolecular. Se ha demostrado que la señal de luminiscencia de estos péptidos es sensible a su estado de fosforilación y se ha estudiado el mecanismo de esa variación. 2. Sensores de ciclina A. El ciclo celular en células eucariotas está regulado por varios complejos de quinasas formados por la asociación de una unidad de quinasa (CDK) con una unidad reguladora de ciclina. Se ha encontrado una gran correlación entre la desregulación de estos complejos y la patología del cáncer. Por ello es interesante el desarrollo de sensores de ciclina que puedan usarse en el estudio de mecanismos implicados en el control del ciclo celular y que sirvan para la identificación de nuevos inhibidores con posibles aplicaciones farmacológicas. Se han diseñado dos tipos de sensores luminiscentes para ciclina A. Por un lado se han preparado sensores luminiscentes basados en la sensibilización intermolecular de complejos peptídicos de Tb3+ que se unen específicamente a ciclina A y que han demostrado buena afinidad y extraordinaria selectividad. Este trabajo constituye la primera demostración del mecanismo de sensibilización intermolecular como base para un sensor biomolecular. Por otra parte se han sintetizado péptidos fluorescentes sensibles a la polaridad que aumentan su emisión selectivamente en presencia de ciclina A, con los que se han puesto a punto ensayos de competición para la identificación de posibles inhibidores de esta proteína. 3. Sensores de cremalleras de leucinas y del factor de transcripción c-Jun. La expresión genética es un proceso perfectamente regulado y dicha regulación se produce fundamentalmente en la etapa de la transcripción por la acción de proteínas especializadas llamadas factores de transcripción cuya alteración puede originar un gran número de enfermedades como el cáncer. Una de las proteínas más frecuentemente implicada en la aparición y desarrollo de cánceres humanos es el factor de transcripción c-Jun, lo que lo convierte en una diana fundamental en el desarrollo de estrategias terapéuticas anticáncer y de nuestros estudios en nuevas estrategias de detección. Se han diseñado sensores basados en cremalleras de leucinas modificadas que incluyen un residuo de Trp dador y un complejo DOTA[Tb3+] aceptor cuya separación, y por lo tanto la eficiencia en la transferencia de energía y en la señal luminiscente, depende del estado de asociación del péptido. De esta manera se pued

El desarrollo embrionario y larval del gasterópodo Siphonaria lessonii (Siphonariidae, Gastropoda) como recurso educativo

El presente artículo corresponde a la experiencia de recolección, mantenimiento en condiciones de laboratorio, observación y seguimiento del desarrollo embrionario y larval de Siphonaria lessonii, Blainville 1827, un pequeño molusco gasterópodo pulmonado de las costas de Rocha. El trabajo está enmarcado dentro del programa de 2ºBD, Orientación Biológica, en el cual venimos planteando diferentes experiencias y trabajos prácticos sobre el tema desde el año 2010. Actualmente hemos logrado identificar y documentar todas las etapas correspondientes al desarrollo y establecer tiempos aproximados entre los estadios para favorecer la observación de todos ellos, datos de los que no hay registro para esta especie en nuestro país

Cuatro vidas en los caminos del exilio socialista. Cuatro modernas de segunda generación en perspectiva biográfica

L’estudi del recorregut de les dones espanyoles, descendents dels refugiats de 1939, expatriades en els anys cinquanta o que des de l’emigració econòmica es van polititzar i es van vincular a les organitzacions socialistes, franceses i mexicanes principalment, ens serveix per analitzar a un grup de joves militants de la segona generació, que van impulsar activitats i van aconseguir no passar inadvertides en un partit reticent a la promoció de la dona. Protagonistes fonamentals en els temps difícils de l’exili, quan la política la feien els homes, i en la posada en marxa del modern PSOE, al retornar a Espanya durant la dècada dels setanta.The study of the journey of Spanish women, descendants of the refugees of 1939, expatriates in the 1950s or who, since economic emigration, became politicized and linked to socialist organizations, mainly French and Mexican, helps us to analyze a group of young militants of the second generation, who promoted activities and managed not to go unnoticed in a party reluctant to promote women. Fundamental protagonists in the difficult times of exile, when politics was made by men, and in the implementation of the modern PSOE, on his return to Spain in the 1970s.El estudio del recorrido de las mujeres españolas, descendientes de los refugiados de 1939, expatriadas en los años cincuenta o que desde la emigración económica se politizaron y se vincularon a las organizaciones socialistas, francesas y mexicanas principalmente, nos sirve para analizar a un grupo de jóvenes militantes de la segunda generación que, a través de la organización de diversas actividades, consiguieron visibilidad en el seno de un partido reticente a la promoción de la mujer. Protagonistas fundamentales en los tiempos difíciles del exilio, cuando la política la hacían los hombres, y en la puesta en marcha del moderno PSOE, a su retorno a España en la década de los setenta

Reversible Control of DNA Binding with Cucurbit[8]uril-Induced Supramolecular 4,4′-Bipyridinium–Peptide Dimers

Financiado para publicación en acceso aberto: Universidade da Coruña/CISUGThe Supporting Information is available free of charge at https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.bioconjchem.1c00063[Abstract] Many cellular processes in living organisms are regulated by complex regulatory networks, built from noncovalent interactions between relatively few proteins that perform their functions by switching between homo- and heterooligomeric assemblies or mono- and bivalent states. Herein, we demonstrate that the conjugation of a 4,4′-bipyridinium scaffold to the basic region of the GCN₄ bZip transcription factor can be exploited to control the dimerization of the conjugate by formation of a supramolecular complex with cucurbit[8]uril. Importantly, this supramolecular complex is able to specifically recognize its target dsDNA, and this binding can be reversibly switched by the application of external stimuli.We are thankful for the funding received from the European Research Council (ERC) under the European Union’s Horizon 2020 research and innovation programme (grant agreement No 851179), the Ministerio de Economía y Competitividad and Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER) (CTQ2016-75629-P), the Agencia Estatal de Investigación and FEDER (CTQ2017-89166-R and PID2019-105272GB-I00) and the Consellería de Educación, Universidade e Formación Profesional, Xunta de Galicia (ED431C 2018/39). P.N thanks the Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades for her PhD fellowship (FPU17/04357). E.P. thanks the UDC-Inditex InTalent Programme for her research contract and funding and the Xunta de Galicia for the Oportunius ProgrammeXunta de Galicia; ED431C 2018/39https://pubs.acs.org/doi/suppl/10.1021/acs.bioconjchem.1c00063/suppl_file/bc1c00063_si_001.pd

Role of nursing in the primary care in the detection of anorexy in adolescents. Narrative review

Trabajo fin de grado en EnfermeríaIntroducción: Los trastornos de la conducta alimentaria han aumentado su prevalencia en mujeres adolescentes en los últimos años. El origen de dichos trastornos es multicausal y biopsicosocial. La enfermera tiene un importante papel en la prevención y detección de dichos trastornos. En este contexto, el término "cribado" se refiere al proceso de identificar a las adolescentes que podrían estar en riesgo de desarrollar un trastorno de la conducta alimentaria mediante la evaluación sistemática de la enfermera de atención primaria. Objetivo general: Determinar la utilidad del cribado de Anorexia Nerviosa en Atención Primaria para la prevención de complicaciones potenciales de dicho trastorno, mediante una revisión narrativa. Objetivos específicos: Se estudia el rol de enfermeras en detectar anorexia nerviosa, su conocimiento de herramientas disponibles y las complicaciones asociadas. Se evalúa su conocimiento de herramientas de cribado y se describen sus intervenciones tras la detección temprana. Metodología: Se ha realizado una revisión narrativa en seis bases de datos, hallándose resultados en seis de ellas: Pubmed, Cinahl, Cuiden, Scielo, Science Direct, Cochrane Plus. El número final de artículos seleccionados ha sido de veinte artículos. Resultados: Después de revisar los artículos, se ha concluido que el cribado de la anorexia nerviosa en atención primaria es útil y se han identificado herramientas efectivas para detección temprana, pero la formación de enfermeras debe mejorar. Las complicaciones afectan psicológica y físicamente, requiriendo intervenciones individualizadas, tratamiento médico y psicológico y participación familiar. Conclusiones: De la revisión narrativa se extrajo que el cribado de la anorexia nerviosa en atención primaria es fundamental para la prevención de complicaciones y la detección temprana de la enfermedad, y es importante que los profesionales de enfermería estén adecuadamente formados en el uso de herramientas para su detección.Introduction: Eating disorders have increased in prevalence in adolescent females in recent years. The origin of these disorders is multi-causal and biopsychosocial. The nurse has an important role in the prevention and detection of these disorders. In this context, the term "screening" refers to the process of identifying adolescent girls who may be at risk of developing an eating disorder through systematic assessment by the primary care nurse. General objective: To determine the usefulness of screening for Anorexia Nervosa in primary care for the prevention of potential complications of the disorder through a narrative review. Specific objectives: To study the role of nurses in detecting anorexia nervosa, their knowledge of available tools and associated complications. We assess their knowledge of screening tools and describe their interventions after early detection. Methodology: A narrative review was carried out in six databases, finding results in six of them: Pubmed, Cinahl, Cuiden, Scielo, Science Direct, Cochrane Plus. The final number of articles selected was twenty. Results: After reviewing the articles, it has been concluded that screening for anorexia nervosa in primary care is useful and effective tools for early detection have been identified, but the training of nurses needs to be improved. Complications affect psychologically and physically, requiring individualised interventions, medical and psychological treatment and family involvement. Conclusions: From the narrative review we conclude that screening for anorexia nervosa in primary care is essential for the prevention of complications and early detection of the disease, and it is important that nurses are adequately trained in the use of screening tools

Características socioculturales relacionados al abandono de la lactancia materna exclusiva en madres que acuden al Centro de Salud San Sebastian, Cusco-2019

La presente investigación intitulada: “CARACTERÍSTICAS SOCIOCULTURALES RELACIONADOS AL ABANDONO DE LA LACTANCIA MATERNA EXCLUSIVA EN MADRES QUE ACUDEN AL CENTRO DE SALUD SAN SEBASTIAN, CUSCO-2019”, tuvo como objetivo: Determinar las características socioculturales relacionadas al abandono de la lactancia materna exclusiva. La metodología fue de tipo descriptivo, correlacional de corte transversal en una muestra probabilística de 110 madres que cumplían criterios de inclusión. Resultados, el 47.3% abandonaron la lactancia a los 5 meses, 45.5% (p=0.159) tienen edades de 23-26 años, 83.6% (p=0.208) convivientes, 53.6% (p=0.004) con 2 a 3 hijos, 68.2% (p=0.137) tienen procedencia urbana, 56.4% (p=0.382) con instrucción secundaria, 53.6% (p=0.014) ama de casa, 60.9% (p=0.006) hablan quechua y castellano, 50.9% (p=0.244) tiene ingreso de 400 a 700 soles, 72.7% (p=0.478) conocen la importancia de la lactancia materna, 60% (p=0.218) consumen alimentos caseros, 52.7% (p=0.002) tuvieron otros motivos para el abandono, 36.4% (p=0.003) indica que él bebe se antoja, 39.1% (p=0.006) indican otros familiares motivaron el abandono, 61.8% (p=0.000) brindaron lactancia mixta antes de los 6 meses, 70.9% (p=0.121) indican la hospitalización o trabajo no justifica el abandono, 43.6% (p=0.191) indican puede ser que la anemia sea motivo para el abandono, 40.9% (p=0.454) indican la diarrea no es motivo para el abandono, 53.6% (p=0.401) indica las infecciones respiratorias no son motivo para el abandono, 35.5% (p=0.336) indican puede ser que la depresión sea motivo para el abandono.Present it untitled investigation: “Characteristics SOCIOCULTURALES RELATED to the ABANDON OF THE EXCLUSIVE BREAST-FEEDING IN MOTHERS THAT the ST. SEBASTIAN, CUSCO ATTEND the HEALTH CARE FACILITY 2019 ”, it had like objective: Determining characteristics socioculturales related to the abandon of the exclusive breast-feeding. The methodology went from descriptive type, transverse court's correlacional in 110 mothers' probabilistic sign that they were obeying criteria of inclusion. Results, the 47,3 % abandoned the nursing to the 5 months, 45,5 % ( p 0,159 ) have 23-26's ages years, 83,6 % ( p 0,208 ) convivientes, 53,6 % ( p 0,004 ) with 2 to 3 children, 68,2 % ( p 0,137 ) have urbane procedence, 56,4 % ( p 0,382 ) with secondary instruction, ( p 0,014 ) you love 53,6 % of house, 60,9 % ( p 0,006 ) speak Quechua and Spanish, entrance of 400 ( p 0,244 ) has 50,9 % to 700 suns, 72,7 % ( p 0,478 ) know the importance of nursingMaternal, 60 % ( p 0,218 ) consume homemade foodstuff, 52,7 % ( p 0,002 ) had another motives for abandon, ( p 0,003 ) you indicate 36,4 % that he drinks you have a craving, 39,1 % ( p 0,006 ) indicate another relatives 70,9 % motivated the abandon, 61,8 % ( p 0,000 ) offered mixed nursing before the 6 months, ( p 0,121 ) they indicate the hospitalization or work does not justify the abandon, 43,6 % ( p 0,191 ) they indicate it may be that anemia be motive for abandon, 40,9 % ( p 0,454 ) indicate the diarrhea he is not Motive for abandon, 53,6 % ( p 0,401 ) little Indian the respiratory infections are not motive for abandon, 35,5 % ( p 0,336 ) they indicate it may be that depression be motive for abandon.Tesi

Probing Tyrosine Nitration with a Small TbIII-Metallopeptide

Financiado para publicación en acceso aberto: Universidade da Coruña/CISUG[Abstract] Tyrosine nitration, a post-translational modification (PTM) that takes place under nitrosative stress conditions, occurs through a non-enzymatic peroxynitrite-mediated reaction. Although protein nitration has long been considered an irreversible PTM involved in nitrosative stress-associated diseases, it has also been suggested to be a regulatory mechanism of signal transduction. Therefore, the development of tools that help to understand this protein modification is of great interest. Herein, we explore a TbIII-chelating metallopeptide to monitor tyrosine nitration. The luminescence of this probe decreases significantly between its non-nitrated and nitrated states, and this reduction in the luminescence intensity is directly related to the degree of tyrosine nitration after treatment with peroxynitrite. Remarkably, the luminescence intensity changes after nitration are not affected in the presence of complex biological media, which makes it a promising tool for understanding this protein modification.We are thankful for the funding received from the MCIN/AEI/10.13039/501100011033 and ERDF A way of making Europe (CTQ2017-89166-R and PID2019-104626GBI00), the Consellería de Cultura, Educación e Universidade, Xunta de Galicia (ED431C 2018/39, ED431B 2020/52, ED431 C 2022/39, and 508/2020), and the European Research Council (ERC) under the European Union's Horizon 2020 research and innovation programme (grant agreement no. 851179). R.S.F. thanks the Consellería de Cultura, Educación e Universidade, Xunta de Galicia for her PhD fellowship (ED481A-2020/008). E.P. thanks the MCIN/AEI/10.13039/501100011033 and ESF Investing in your future for her Ramón y Cajal contract (RYC2019-027199-I). Funding for open access charge: Universidade da Coruña/CISUGXunta de Galicia; ED431C 2018/39Xunta de Galicia; ED431B 2020/52Xunta de Galicia; ED431C 2022/39Xunta de Galicia; ED481A-2020/00

Agonist-dependent modulation of G-protein coupling and transduction of 5-HT1A receptors in rat dorsal raphe nucleus

5-HT1A receptors couple to different Go/Gi proteins in order to mediate a wide range of physiological actions. While activation of post-synaptic 5-HT1A receptors is mainly related to inhibition of adenylyl cyclase activity, functionality of autoreceptors located in raphe nuclei has been classically ascribed to modifications of the activity of potassium and calcium channels. In order to evaluate the possible existence of agonist-directed trafficking for 5-HT1A autoreceptors in the rat dorsal raphe nucleus, we studied their activation by two agonists with a different profile of efficacy [(+)8-OH-DPAT and buspirone], addressing simultaneously the identification of the specific Galpha subtypes ([35S]GTPgammaS labelling and immunoprecipitation) involved and the subsequent changes in cAMP formation. A significant increase (32%, p<0.05) in (+)8-OH-DPAT-induced [35S]GTPgammaS labelling of immunoprecipitates was obtained with anti-Galphai3 antibodies but not with anti-Galphao, anti-Galphai1, anti-Galphai2, anti-Galphaz or anti-Galphas antibodies. In contrast, in the presence of buspirone, significant [35S]GTPgammaS labelling of immunoprecipitates was obtained with anti-Galphai3 (50%, p<0.01), anti-Galphao (32%, p<0.01) and anti-Galphai2 (29%, p<0.05) antibodies, without any labelling with anti-Galphai1, anti-Galphaz or anti-Galphas. The selective 5-HT1A antagonist WAY 100635 blocked the labelling induced by both agonists. Furthermore, (+)8-OH-DPAT failed to modify forskolin-stimulated cAMP accumulation, while buspirone induced a dose-dependent, WAY 100635-sensitive, inhibition of this response (Imax 30.8+/-4.9, pIC50 5.95+/-0.46). These results demonstrate the existence of an agonist-dependency pattern of G-protein coupling and transduction for 5-HT1A autoreceptors in native brain tissue. These data also open new perspectives for the understanding of the differential profiles of agonist efficacy in pre- vs. post-synaptic 5-HT1A receptor-associated responses